Jednom ćelije u kojima uzgajamo

tvornica ćelijasu kontaminirane, većinom je teško rukovati.Ako su kontaminirane ćelije vrijedne i teško ih je ponovo nabaviti, za njihovo uklanjanje mogu se koristiti sljedeće metode.

1. Koristite antibiotike

Antibiotici su efikasniji u ubijanju bakterijafabrike ćelija.Kombinirani lijekovi su efikasniji od lijekova sami.Preventivni lijekovi su efikasniji od lijekova nakon kontaminacije.Preventivni lijekovi uglavnom koriste dvostruki antibiotik (penicilin 100u/mL plus streptomicin 100μg/mL).Nakon kontaminacije, metoda čišćenja mora biti 5 do 10 puta veća od uobičajene količine.Lijek treba koristiti 24 do 48 sati nakon dodavanja, a zatim ga zamijeniti uobičajenom rutinom.Kulturna tečnost.Ova metoda može biti efikasna u ranim fazama kontaminacije.Pored penicilina i streptomicina, antibiotici koji se koriste mogu uključivati ​​i gentamicin, kanamicin, polimiksin, tetraciklin, nistatin, itd. Obično se koriste 400 do 800 μg/mL kanamicina ili 200 μg/mL tetraciklina.Podloga se mijenja svaka 2 do 3 dana i prenosi na 1 do 2 generacije za liječenje.Posljednjih godina objavljeno je da su 4-fluoro, 2-hidroksikinolin (Ciprofloxacin, Cip), derivat Pleu-romutilina (derivat Pleu-romutilina, BM-Cyclin2: BM-1 i derivat tetraciklina (BM-2)) antibiotici. efikasan u ubijanju mikoplazme kada se koristi sam ili u kombinaciji.Sva ova tri antibiotika pripremaju se u 250X koncentrovane otopine u PBS-u i čuvaju na -20°C za kasniju upotrebu.Koncentracija upotrebe Cip je 10 μg/mL, BM-1 je 10 μg/mL, a BM-2 je 5μg/mL.Kada koristite, prvo aspirirajte kontaminiranu podlogu za kulturu, dodajte RPMI1640 medij za kulturu koji sadrži BM-1, zatim aspirirajte medij za kulturu nakon 3 dana, dodajte RPMI1640 medij za kulturu koji sadrži BM-2, i kulturu 4 dana, i tako 3 uzastopna dana .rundi, dok se mikroskopijom fluorescentnog bojenja 33258 ne dokaže da je mikoplazma eliminisana, zatim se dodaje normalna podloga za kulturu i pasiranje 3-4 puta.

2. Termički tretman

Inkubacija kontaminirane kulture tkiva na 41°C tokom 18 sati može ubiti mikoplazmu, ali ima štetne efekte na ćelije.Stoga, prije tretmana treba provesti preliminarni test kako bi se istražilo vrijeme zagrijavanja koje može ubiti mikoplazmu u maksimalnoj mjeri i imati najmanji utjecaj na stanice.Ova metoda je ponekad nepouzdana.Ako se prvo liječi lijekovima, a zatim zagrijava na 41°C, učinak će biti bolji.

3. Koristite serum specifičan za mikoplazmu

Kontaminacija mikoplazmom može se ukloniti sa 5% imuno seruma zečje mikoplazme (titar hemaglutinacije 1:320 ili više).Budući da specifično antitijelo može inhibirati rast mikoplazme, ono postaje negativno 11 dana nakon tretmana antiserumom i ostaje negativno 5 mjeseci kasnije.je negativan.Međutim, ova metoda je više problematična i nije tako praktična i ekonomična kao upotreba antibiotika.

4. Druge metode

Pored gore navedenih metoda uklanjanja kontaminacije, postoje i metode inokulacije i sterilizacije kod životinja, metode fagocitoze makrofaga, metode dodavanja bromouracila u kontaminiraneboce kulturea zatim ih ozračiti svjetlom, i metodama filtracije, itd., ali su sve više problematične i nedjelotvorne.Stoga, kada dođe do kontaminacije mikoplazmom, osim ako nije od posebno važne vrijednosti, ona se općenito odbacuje i ponovno uzgaja.

kontaktirajte Whatsapp & Wechat: +86 180 8048 1709